现代妇产科进展

2018, v.27(06) 418-420+425

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LV-EGFP-inhba过表达慢病毒载体转染大鼠卵巢颗粒细胞的实验研究
Construction of Inhba overexpression lentivirus vectors and transfection into rat granular cells in vivo

王继东;罗爽;方政慧;

摘要(Abstract):

目的:构建inhba基因过表达的慢病毒载体(lenti-EGFP-inhba),观察体外转染大鼠卵巢颗粒细胞的有效性。方法:p LVX-EGFP-3FLAG质粒系统经EcoRI酶切使之线性化。inhba基因(NM_008380)PCR扩增后同源重组入线性化的表达质粒系统。Western blot法检测表达质粒目的基因表达。将构建成功的慢病毒载体(lenti-EGFP-inhba)转染大鼠卵巢颗粒细胞(MOI=20),检测目的基因表达。结果:PCR扩增产物与目的基因大小吻合,重组质粒系统经转化后获得阳性克隆,转染293T细胞可见EGFP-inhba融合蛋白表达。Western blot获得76k Da分子量大小阳性条带,与融合蛋白分子量大小一致。lentiEGFP-inhba体外转染大鼠卵巢颗粒细胞,倒置荧光显微镜下可见EGFP表达。结论:lenti-EGFP-inhba表达载体成功构建,并可在体外有效转染大鼠卵巢颗粒细胞。

关键词(KeyWords): Activin A;慢病毒载体;转染;颗粒细胞

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 山东省医药卫生科技发展计划(No:2016WS0127)

作者(Author): 王继东;罗爽;方政慧;

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